一、反硝化細菌富集培養
（1）培養基成分及其製備：
KNO3 2克
檸檬酸鈉5 克
K2HPO4 1 克
KH2PO4 1 克
MgSO4·7H2O 0.2 克
陳海水（或蒸餾水）1000 毫升
將上面成分溶解於水，調pH 爲7.2-7.6，分裝於試管或燒瓶．於121 ℃ 蒸汽下滅菌20 分鐘。
（2）接種與結果觀察：在裝富集培養液的試管中分別加少量的海泥或池泥．河泥，在20℃ 或25-30℃ 下培養5-15 天或3-10天。若培養液變混濁，有氣泡產生，說明有反硝化菌生長，或檢驗其有無氨和亞硝酸產生，則可判定是否有反硝化細菌生長．
二、反硝化細菌分離培養
（1）分離培養基成分及製備．
葡萄糖1克
酒石酸鉀鈉10 克
KNO3 2 克
K2HPO4 0.2克
CaCl·2H2O 0.5 克
陳海水或蒸餾水1000毫升
將上述鹽類溶於水中，調pH 爲7.4-7.6，裝於燒瓶中，121℃ 蒸汽下滅菌20 分鐘．
（2）接種與結果觀察：
① 將上述培養液傾入硅酸膠平板上，於50 ℃ 下烘烤至表面無水流動，不宜過幹，以免破裂．
② 用富集培養物塗布接種於烘烤後的平板培養基上。
③ 於適溫厭氧條件下培養至長出足夠大的菌落．
④ 觀察菌落形態，作革蘭氏染色，油鏡下觀察其反應及菌體形態．
⑤ 挑取菌落於液體培養基上培養，檢驗其培養基中有無硝酸鹽（用二苯胺試劑檢驗）和亞硝酸鹽（用鋅-碘-澱粉或格里斯試劑檢查，見硝化細菌的富集與分離）存在，若硝酸根或亞硝酸根消失，可確定所分離細菌屬反硝化細菌．
反硝化細菌的種類很多。它們主要屬於革蘭氏染色負反應，不生芽孢的桿菌，並都屬兼、嫌氣性細菌，在通氣不良的情況下，可完全利用硝酸鹽或亞硝酸鹽中的氧來氧化所需的有機物。即對硝酸鹽和亞硝酸鹽起反硝化作用也就是對它們起還原作用
你要設計試驗培養都是異養，所以用有機碳源微生物培養基，放相應的碳源、氮源、生長因子、無機鹽和水但注意硝化、反硝化菌的區別 ，硝化細菌是需氧型，反硝化細菌是厭氧型。
