層析柱保留時間計算公式爲Rt=t0（1+KVs/Vm），式中Rt表示某物質的保留時間，t0是色譜系統的死時間，即流動相進入色譜柱到流出色譜柱的時間，這個時間是色譜柱的孔隙、流動相的流速等因素決定。
K是分配係數，Vs、Vm表示固定相和流動相的體積。這個公式又叫做色譜過程方程，是色譜學最基本的公式之一。保留時間是樣品從進入色譜柱到流出色譜柱所需要的時間，不同的物質在不同的色譜柱上以不同的流動相洗脫會有不同的保留時間，因此保留時間是色譜分析法比較重要的參數之一。另外，保留時間由物質在色譜中的分配係數決定。
相對保留時間是某組分的校正保留時間與相應標樣的校正保留時間之比， 校正保留時間是組分的保留時間減去空氣的保留時間。 圖沒法畫，用數據表示，如空氣的保留時間是2.5s，組分的保留時間是6.3s，標樣的保留時間是8.2s， 組分的校正保留時間是6.3-2.5=3.8s，標樣的校正保留時間是8.2-2.5=5.7s，組分的相對保留時間是3.8/5.7=0.67
