《猫和老鼠》主要人物包括：汤姆（猫）、杰瑞（鼠）、两只鞋太太（人）、泰菲（鼠）、布奇（猫）等。
1、汤姆（猫）
总是闪着机会主义的光芒，弓着腰在一旁等待机会出击杰瑞。在动画片中，它总有一种强烈的欲望，总想抓住与它同居一室却难以抓住的老鼠杰瑞。但总是遭到失败。
2、杰瑞（鼠）
总是用挑逗的眼神看着镜头，并且常常在不经意期间玩弄汤姆。因为杰瑞古灵精怪，所以经常能成功的戏弄汤姆且让他糗事百出，不过有时他也会被汤姆戏弄，时而在戏弄汤姆的同时也会享受到汤姆对它的关心，让它感动。
3、两只鞋太太（人）
动画中汤姆猫的几种不同主人中最常出现的一位，经常处理两位主角在自己家中所制造的麻烦。由于视角问题，镜头只能看到她腰以下的部位。在动画中的设定大约40岁左右，身材粗壮的大妈形象。1952年之后不再登场。
4、泰菲（鼠）
