克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。
将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。
常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。
克隆载体的要求：
①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。
②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。
③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。
④容易从宿主细胞中分离纯化出来，这才便于重组操作。
⑤有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。
就是能够通过限制性内切酶，将目的DNA片段整合进去，并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。 常见的有质粒，病毒，噬菌体等。
