操作步驟：
1、 用6×SSC潤濕帶有固定了的DNA的膜。
2、 將膜的DNA面朝上置於雜交管中，ATP溶液的加入量為約1 ml/cm2 膜，在68℃雜交爐中滾動3 h。
3、 在預雜交即將結束時，於100℃將DNA探針變性10 min，置於冰中。
4、 將雜交管中的APH溶液倒掉，換上等體積的預熱的APH溶液（68℃），加入變性探針，68℃滾動下雜交過夜。
5、 倒掉APH液，加入等體積的2×SSC/0.1%SDS，室温下滾動温育10 min。5 min後更換洗膜液。
6、 用等體枳的0.2×SSC/0.1%SDS替換上述洗膜液，室温下滾動温育10 min 後更換洗膜液。
7、 如果需要，在42℃，0.2×SSC/0.1%SDS進行15 min 中等嚴緊度的洗膜2次。
8、 如果需要，在68℃，0.1×SSC/0.1%SDS進行15 min 高等嚴緊度的洗膜2次。
9、 倒掉最後的洗膜液，在室温下用2×SSC漂洗膜，並吸乾多餘的液體，用塑料膜包裹後放射自顯影。
